"1581451"^^ . . "134603837"^^ . . . "The Primer Generator"^^ . "Ligation-During-Amplification (LDA) ist eine molekularbiologische Methode zur linearen Amplifikation von zirkul\u00E4rer DNA (zum Beispiel einem Plasmid) in einem PCR-basierten Verfahren. Dabei werden ein oder mehrere sequenzspezifische Primerpaare mit den einzuf\u00FChrenden Sequenzver\u00E4nderungen, eine thermostabile DNA-Polymerase sowie eine thermostabile DNA-Ligase verwendet. Diese Methode wird auch als QuikChange Multi von Stratagene vermarktet."@de . . . . "20090122150440"^^ . . . . . . "Ligation-During-Amplification (LDA) ist eine molekularbiologische Methode zur linearen Amplifikation von zirkul\u00E4rer DNA (zum Beispiel einem Plasmid) in einem PCR-basierten Verfahren. Dabei werden ein oder mehrere sequenzspezifische Primerpaare mit den einzuf\u00FChrenden Sequenzver\u00E4nderungen, eine thermostabile DNA-Polymerase sowie eine thermostabile DNA-Ligase verwendet. Diese Methode wird auch als QuikChange Multi von Stratagene vermarktet. Diese Methode wird genutzt zur gezielten Mutagenese von Plasmiden im Zuge einer gew\u00FCnschten Anpassung des Vektors oder der Expressionskassette im Zuge des Proteindesigns.Dabei wird mit einem mutagenen Primer ein Strang der zirkul\u00E4ren Plasmid-DNA (Template) in einem Thermocycler in mehreren Zyklen linear amplifiziert und ligiert. Anschlie\u00DFend wird die parentale, methylierte Plasmid-DNA (Template) mit dem Restriktionsenzym DpnI, welches nur dam methylierte DNA spaltet, abgebaut. Danach wird die amplifizierte, mutierte, einzelstr\u00E4ngige, zirkul\u00E4re DNA in Bakterien transformiert und dort zur doppelstr\u00E4ngigen Plasmid-DNA vervollst\u00E4ndigt. Eine weitere Methode basiert auf der Umkehrung des Prinzips. Hierzu wird zur Amplifikation Hydroxymethyl-Desoxycytidin (HMdCTP) anstelle des dCTPs gegeben und anschlie\u00DFend mit einer Mischung aus den Restriktionsendonukleasen ApeK1 und Pho1 in einem Aktivit\u00E4tsverh\u00E4ltnis von 2:1 restringiert. Dadurch wird nur die DNA-Vorlage (ohne Hydroxymethyl-Desoxycytidine) zerlegt. Die Ligation erfolgt nach der Transformation in vivo."@de . "Ligation-During-Amplification"@de . . .